SYBR Green I法：SYBR Green I是一种具有绿色激发波长的染料，比较大吸收波长约为 497 nm，北京**基因荧光定量PCR分析服务，发射波长比较大约为 520 nm，可以和所有的 dsDNA 双螺旋小沟区域结合。因为在游离状态下 SYBR Green I 发出的荧光较弱，但是当它与双链 DNA 结合后，荧光就会**增强，而且荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。此法的优点是它可以监测任何 dsDNA 序列的扩增，检测方法较为简单，成本较低，但也正是由于荧光染料能和任何dsDNA 结合，北京**基因荧光定量PCR分析服务，如非特异性扩增产物和引物二聚体也能与染料结合而产生荧光信号，使实验产生假阳性结果，北京**基因荧光定量PCR分析服务，因此其特异性不如探针法。因为非特异性产物和引物二聚体的变性温度要比目标产物的低，所以可以在熔解曲线反应过程中利用软件分析仪器收集到信号进行鉴别
有关转基因及其产品的安全性的争论在国内外愈演愈烈，各国**纷纷出台一系列的政策、法规，要求对转基因作物进行标识，有些国家对转基因的比较低含量做了限定，其阈值大小从1-5％不等。这就要求必须对转基因及其产品进行检测。 常规的检测方法多采用PCR法，如PCR-凝胶电泳、PCR-ELISA等。这些方法普遍存在着PCR产物污染、特异性不高及速度慢等问题。荧光PCR技术是一种新近发展起来的检测技术，它的应用将从根本上解决这些问题。 1.收集了国内外商品化的转基因作物品种，并通过查阅有关文献及网站初步确定了各种作物的转基因构建图； 2．于反应体系中引入UNG去污染酶，建立了无污染荧光PCR扩增体系； 3．以植物内源基因18SrRNA为靶标，设计了特异性引物和荧光探针，建立了以18SrRNA基因的扩增与否来判断核酸提取质量好坏的方法； 4．以FAM荧光素为标记，建立了以35S、NOS、NPTⅡ、Pat、Bar、FMV和CryⅢa为筛选目标的转基因农作物荧光PCR定性检测体系； 5．分别以FAM和TET两种荧光素标记外源基因和内源基因，建立了转基因大豆及转基因玉米的荧光定量PCR检测体系。
混合液在加入逆转录酶MMLV 之前先70℃干浴3分钟，取出后立即冰水浴至管内外温度一致，然后加逆转录酶0.5μl，37℃水浴60分钟。
取出后立即95℃干浴3分钟，得到逆转录终溶液即为cDNA溶液，保存于-80℃待用。 管家基因(β-actin)实时定量PCR
β-actin阳性模板的标准梯度制备 阳性模板的浓度为1011，反应前取3μl按10倍稀释(加水27μl并充分混匀)为1010，依次稀释至109、108、107、106、105、104，以备用。
反应体系如下：
标准品反应体系 序号 反应物 剂量 1 SYBR Green 1 染料 10μl 2 阳性模板上游引物F 0.5μl 3 阳性模板下游引物R 0.5μl 4 dNTP 0.5μl 5 Taq酶 1μl 6 阳性模板DNA 5μl 7 ddH2O 32.5μl 8 总体积 50μl 轻弹管底将溶液混合，6000rpm短暂离心。
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