荧光定量PCR实验步骤：
取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，天津病原微生物荧光定量PCR检测服务，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%，天津病原微生物荧光定量PCR检测服务。
RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，天津病原微生物荧光定量PCR检测服务，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
为了正确地评估 PCR 效率，至少需要 3 次重复和至少 5 个数量级倍数的模板浓度。图 6 说了建议此精确级别的理由，它证明在 1 个数量级倍数与 5 个数量级倍数范围内测试稀释模板时，获得的斜率或效率可能产生数学偏差。因此，即使检测 ** 有效，由于每个稀释点都存在标准差，检测一个数量级倍数的连续稀释时，可能获得 70 至 170% 的范围。在 5 个数量级倍数范围内做相同数量的稀释点或重复，可能的偏移只有 ±8%。这意味着在 5 个数量级倍数范围内，如果效率为 94%，则该实验的效率范围介于 88% 到 ** 之间。为了准确测定 PCR 反应的效率，必须进行 5 个数量级倍数的连续稀释。-3.3 ±10% 的斜率意味着效率达到 ** ±±10%。PCR 反应效率越低，那么灵敏度越低。
一个评估 PCR 效率的关键参数是 R2，它是说明如何使用一个数值预测另一个数值的相关程度的统计学术语。如果 R2 为 1，那么 Y 值 (Ct) 可以用来准确预测 X 值（图7A）。如果 R2 为 0，那么就不能通过 Y 值预测 X 值（图 7B）。R2 值 >0.99 表示两个数值之间相关的置信度良好。
精确度
标准差（偏差的平方根）是**常用的精确度计量方法。如果许多数据点都靠**均值，则标准差就小；如果许多数据点都远离平均值，则标准差就大。
实际上，足够多重复次数产生的数据**形成大致的正态分布。这经常可通过经典的中心极限定理来证明，该定理称大量**同分布随机变量的和在无限多时趋向于正态分布。如图 8A 所示，约 68% 的值在平均值的 1 个标准差之内，约 95% 的值在平均值的 2 个标准差之内，约 99.7% 的值在平均值的 3 个标准差之内。
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