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天津膜蛋白Western Blot检测分析服务 欢迎来电 上海朝瑞生物科技供应

上传时间:2020-05-14 浏览次数:
文章摘要:免疫印迹法(immunoblotting)因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法Southernblot相类似,亦被称为Westernblot。免疫印迹(westernblotting)是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的

免疫印迹法(immunoblotting )因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法Southern

blot相类似,亦被称为Western blot。免疫印迹(western blotting)是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术,天津膜蛋白Western Blot检测分析服务,天津膜蛋白Western Blot检测分析服务。它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的辨力与抗原抗体反应的特异性相结合。典型的印迹实验包括三个步骤①蛋白质的电泳分离;②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上,用非特异性,非反应活性分子封闭固体膜上未吸附蛋白质区域;③免疫学检测。免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端,极大地提高了其利用率,天津膜蛋白Western Blot检测分析服务、分辨率和灵敏度,使其成为使用**的免疫化学方法之一。

Western blotting堪称蛋白质研究中的经典方法。学生物的几乎无人不晓,即使没亲手做过,也清楚其原理。经典果然是经典,30年来其操作步骤几乎没变过,依然是跑胶-转膜-封闭-孵育-检测。近两年,各大公司陆续推出了Western blotting方面的新仪器,如新型转印系统,确实能省时省力不少,但仍然不能完全克服研究人员在面临的挑战。Western

blotting仍存在重复性差、实验耗时长、无法准确定量等问题。

近日,美国proteinsimple公司推出了一种Simple Western™分析,彻底改变了整个Western blot。此分析在一台名为Simon的仪器上开展,Simon将所有实验步骤自动化,包括蛋白上样和分离、免疫印迹、洗涤、检测以及数据的定量分析,让研究人员从繁重的劳动中解放出来,同时避免了可能影响实验重复性的人为因素。

转膜(Transfer)

推荐在Western实验中选用PVDF膜。硝酸纤维素膜(NC膜)也可以使用,但硝酸纤维素膜比较脆,在操作过程中特别是用镊子夹取等过程中容易裂开。膜的使用请参考生产商的推荐使用步骤。

通常如果使用Bio-Rad的标准湿式转膜装置,可以设定转膜电流为300-400mA,转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定,目的蛋白的分子量越大,需要的转膜时间越长,目的蛋白的分子量越小,需要的转膜时间越短。在转膜过程中,特别是高电流快速转膜时,通常会有非常严重的发热现象,比较好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。

转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准,通常分子量比较大的1-2条带较难全部转到膜上。转膜的效果也可以用丽春红染色液(P0022)对膜进行染色,以观察实际的转膜效果。也可以用考马斯亮蓝快速染色液(P0017)对完成转膜的SDS-PAGE胶进行染色,以观察蛋白的残留情况。

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