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北京 重组人源Claudin18.2蛋白 欢迎咨询 上海朝瑞生物科技供应

上传时间:2020-05-15 浏览次数:
文章摘要:    1)细胞***率检测:将细胞分为对照组、单独热疗组、吉西他滨化疗组、5-氟尿嘧啶化疗组、两药联合组、两药联合加热疗六组,采用MTT(噻唑蓝)法检测不同组人胰腺*PANC-1细胞***

    1)细胞***率检测:将细胞分为对照组、单独热疗组、吉西他滨化疗组、5-氟尿嘧啶化疗组、两药联合组、两药联合加热疗六组,采用MTT(噻唑蓝)法检测不同组人胰腺*PANC-1细胞***率,同时以这六组作为之后实验的分组标准。(2)通过苏木精-伊红法(HE)染色法观察人胰腺*PANC-1细胞形态,比较热疗、化疗对人胰腺*PANC-1细胞形态的影响。(3)通过免疫细胞化学法检测观察人胰腺*PANC-1细胞、化疗对。(4)通过WesternBlot法半定量地检测人胰腺*PANC-1细胞。结果:(1)MTT实验结果显示:单独热疗对PANC-1细胞增殖具有一定***效果(P<)。两药联合加热疗对细胞增殖的***效果比较好,两药联合效果其次,单独化疗效果要优于单独热疗。(2)HE染色结果显示:正常对照组细胞团簇样生长良好,核大偏位。经热疗处理后人胰腺*PANC-1细胞体积增大;化疗组细胞呈纺锤样,胞浆中可见空泡。两药联合外加热疗组细胞浆中空泡进一步增多,提示肿瘤细胞损伤加重,北京 重组人源Claudin18.2蛋白。(3)免疫细胞化学结果显示:。单独热疗可以使。吉西他滨组、5-氟尿嘧啶组、吉西他滨联合5-氟尿嘧啶组,北京 重组人源Claudin18,北京 重组人源Claudin18.2蛋白.2蛋白。两药联合外加热疗组。(4)WesternBolt结果与免疫细胞化学结果一致。结论:人胰腺*PANC-1细胞表达。热疗可增加。

    3%H202:30uL。h.终止液H2S04:lmol/L。操作方法包被先取96孔ELISA板,将(ug/ml),按100uL/孔加入板孔中,4。C包被过夜;倒掉包被液,加入封闭液,室温下封存2h;弃去封闭液,用洗涤液洗6次,每次2min;分别加入倍比稀释的山羊抗人(500ug/ml)和抗血清,100wL/孔,室温下孵育lh;弃去抗体和抗血清,用洗涤液洗6次,每次3min;加入HRP标记的抗山羊二抗,100nL/孔,室温孕育lh;弃去二抗,用洗涤液洗6次,每次3min;加入底物显色液,100uL/孔,室温,显色10-20min;加入终止液,50"L/孔,终止反应;酶标仪读数,测定没孔在4卯nm的吸光值。免疫印迹反应测定血清抗,结束后,按Bio-Rad产品说明,凝胶靠近阴极一侧,硝酸纤维膜(NC膜)靠近阳极一侧,置转移缓冲液中(25mmol/LTris、192mmol/LGlycine、20%甲醇),100V恒压lh,将蛋白从凝胶电转移至NC膜上,电转移结束后,取出NC膜,用洗涤液TBST(含mol/TBS、Tween20)室温洗3次,浸入封闭液(含2%BSA的TBST)中37。C,1h,洗涤液(TBST)室温洗3次,加荷瘤小鼠抗血清,37t孵育1h,TBST室温洗膜3次,加入兔抗山羊IgG-HRP二抗(中杉公司),37'C孵育1h,TBST室温洗膜3次,再用TBS洗3次,NC膜浸入OPD显色液中,室温避光显色10min,蒸馏水冲洗终止反应。

    NC膜浸入OPD显色液中,室温避光显色10min,蒸熘水冲洗终止反应(参见图4)。(4)抑瘤实验每周观察小鼠体内抗体滴度变化,待观察到形成**组织块后隔天检测**体积和小鼠体重。小鼠死亡时取出**组织称重,计算抑瘤率(参见图5)。(5)综上所述,本发明的效果如下①设计并构建了。②通过动物实验证实rhClaudinl滴度中和抗体1:10000以上。③该抗体(抗)可以与人KATOIII和PANC-1肿瘤细胞以及小鼠胃*MFC和胰腺*MPC-83细胞相结合。该蛋白作为**疫苗可***小鼠体内胃*MFC和胰腺*MPC-83细胞的生长。2权利要求1.一种重组人,其序列为HMKSSQYIKANSKFIGEFDQWSTQDLYNNPVTAVFNYQGLWRSCVRESSGFTECRGYFTLLGLPAMLQAV。2.获得如权利要求1所述的重组人,其特征在于,依次包括下述步骤-(1)RT-PCR方法获得***个胞外区基因片段(第28位氨基酸至第79位氨基酸),与^83。_843基因片段连接后,插入pQE-30原核表达载体,转化大肠杆菌;在大肠杆菌中获得***表达,经纯化后得到。(2)重组蛋白表达将构建好的菌,在大肠杆菌中获得***表达,经亲和纯化后得到。(3)融合蛋白的纯化和复性表达产物经裂菌、溶解包涵体、Ni-NTA亲和层析柱的纯化,蛋白纯度可达80%以上。3.如权利要求2所述的重组人,其特征在于。

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